Polen Bajo el Microscopio – Métodos, Técnicas y Observaciones

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Métodos, técnicas y observaciones

¿Qué es el polen?

El polen es un pequeño grano formado por unas pocas células. A simple vista, aparece como una sustancia parecida al polvo de color amarillento (amarillo pálido) que se dispersa por el viento o los insectos.

El polen se forma en los sacos (o microsporangios) de las anteras que se encuentran en las flores de las plantas. El desarrollo de las anteras de las plantas también implica el crecimiento y la diferenciación de los tejidos que se desarrollan para producir los sacos de polen. A esto le sigue un proceso de división celular (meiosis) que da como resultado la formación de grupos llamados cuartetos dentro de las cámaras del saco de polen.

Luego, el cuarteto sufre más divisiones para producir polen, que sirve como gametofito de planta masculina (plantas con semillas) para la reproducción. Dependiendo del tipo de planta, el polen es dispersado por el viento o por insectos al estigma receptivo.

* Una planta polinizada por el viento se llama anemófila, mientras que las que son polinizadas por insectos se llaman entimófilas.

* Una vez que un grano de polen cae sobre el estigma receptor, comienza a absorber agua y se activa. Esto hace que el gametofito en el grano desarrolle un tubo que llegue al óvulo de la flor, lo que permite que las células del gameto masculino sean transportadas al óvulo para la fertilización.

Microscopía de polen


Toma de muestras

Requisitos

  • Aguja (o bucle de hilo)
  • puntas de pipeta
  • Pinzas de depilar

Procedimiento

  • Recolectar anteras sanas de las flores (esto puede implicar inspeccionar varias flores en busca de anteras sanas con alto contenido de polen)
  • Con la aguja o el lazo de alambre de laboratorio, intente raspar con cuidado y cuidado el polen de las anteras y guárdelo en la punta de la pipeta o en el microtubo.

* Si el polen no se va a usar inmediatamente, se debe secar y almacenar congelado.


Requisitos

  • un estereomicroscopio
  • 50 por ciento de glicerina
  • Portaobjetos de microscopio
  • Alcohol

Procedimiento

Al observar los granos de polen con el estereomicroscopio, es recomendable observar el polen tratado (lavado con un poco de alcohol) y los granos sin tratar por separado para ver la diferencia.

El procedimiento consta de los siguientes sencillos pasos:

  • Lave los granos de polen con alcohol y coloque la muestra en un portaobjetos de microscopio (también conserve una muestra sin lavar)
  • Agregue 50 por ciento de glicerina a la muestra y colóquela bajo el microscopio estereoscópico para verla.

Los estudiantes también pueden colocar una antera de planta sana con polen (sin tratarla con alcohol ni agregarle glicerina) en la platina del estereomicroscopio e intentar observar cómo se ve.

* Los granos de polen tienen una superficie aceitosa que se puede eliminar fácilmente con alcohol. Por lo tanto, se puede utilizar alcohol para eliminar la capa aceitosa y así ver mejor la superficie del grano. Se utiliza glicerina al cincuenta por ciento para hidratar los granos y hacer que se hinchen para una buena visualización.

Cuando se observan a través de un microscopio estereoscópico, los granos de polen aparecerán como estructuras/partículas irregulares de forma gruesa. Sin embargo, la forma y apariencia de los granos variará según el tipo de polen que se estudie. Para los granos no tratados, el contraste es bajo en comparación con los granos de polen tratados.


Método de gelatina de glicerol

La técnica de gelatina de glicerol es una de las técnicas de montaje de polen más utilizadas. Esto implica el uso de gelatina de glicerol, que consta de 10 gramos de gelatina, 35 ml de agua destilada y 30 ml de glicerol.

Para obtener los mejores resultados posibles, se recomienda a los estudiantes que utilicen polen recién recolectado.

Requisitos

  • Muestra de polen recién recolectada
  • Un microscopio compuesto
  • Jalea de glicerina
  • Agua caliente
  • Solución IPA (solución de alcohol isopropílico)
  • portaobjetos de vidrio
  • Portaobjetos de microscopía
  • Agua destilada

Procedimiento

  • Coloque una pequeña cantidad de la muestra (polen) en una taza pequeña y agregue unas gotas de solución IPA durante unos 10 minutos (el alcohol isopropílico eliminará la capa aceitosa de la superficie de los granos. Si no se eliminó el polen de las anteras, la solución también permite aislarlas de la pantera para retener solo los granos de polen)
  • Con agua tibia, derrita la glicerina y déjela tibia.
  • Obtenga 1 o 2 gotas de mezcla de IPA y polen con un gotero y colóquelas en el centro de un portaobjetos de vidrio limpio (prepare dos portaobjetos)
  • Coloque el portaobjetos en una placa caliente durante unos 2 minutos para que se seque.
  • Agregue una gota de gelatina de glicerina en un portaobjetos de microscopio y baje suavemente el cubreobjetos en ángulo sobre uno de los portaobjetos preparados para eliminar las burbujas de aire y poner la gelatina en contacto con el polen.
  • Deje reposar el portaobjetos (con gelatina) durante unos 5 minutos en una placa caliente. Esto permite que la glicerina penetre en los granos de polen.
  • Coloque el portaobjetos en un lugar fresco hasta que la gelatina cuaje (para esta técnica, se puede agregar una pequeña cantidad de esmalte de uñas para sellar los lados y permitir que la preparación se almacene y use durante varios meses)
  • Ver las dos diapositivas bajo el microscopio.

Observación

Cuando se ve bajo un microscopio, el portaobjetos teñido es más claro debido a un mejor contraste. Los granos aparecerán como partículas diminutas en forma de huevo con lo que parece ser una superficie escamosa o adornos.

El portaobjetos sin color parece más transparente/translúcido y no ofrece una visión clara de la superficie del grano. Sin embargo, la apariencia de los granos también depende en gran medida del tipo de planta de la que se obtuvo el polen.

Técnica de montaje húmedo

Requisitos

  • Glicerol
  • portaobjetos de vidrio
  • Listón de cubierta
  • cuentagotas

Procedimiento

  • Añadir dos gotas de glicerol en un portaobjetos limpio
  • Agregue una pequeña muestra de polen (esto también se puede hacer tocando la antera para obtener el polen)
  • Coloque suavemente el cubreobjetos sobre la muestra en ángulo para eliminar las burbujas de aire.
  • El esmalte de uñas se puede usar en los lados para sellar
  • Coloque el portaobjetos en el microscopio para su visualización.

* Para esta técnica, se puede usar azul de toluidina o acetocarmín para teñir la muestra para mayor claridad.

Técnica de montaje en seco

Es el método más fácil que implica los siguientes pasos simples:

  • Coloque la muestra en el portaobjetos de vidrio del microscopio.
  • Cubrir la muestra de polen con un cubreobjetos
  • Vista de microscopio

Visualización de tubos polínicos al microscopio


Los tubos polínicos son estructuras importantes que crecen a lo largo del estilo y permiten que los gametos sean transportados al ovario para la fertilización. Para ver los tubos polínicos bajo un microscopio, se puede usar la solución de Farmer e hidróxido de sodio.

Requisitos

  • Flores de Mimulus ringens (con anteras sanas)
  • 70% etilo
  • Alcohol, solución campesina.
  • Solución de sulfito de sodio 0,4 M
  • 1 molar de hidróxido de sodio
  • NaOH 8 M o NaOH 10 M
  • Azul de anilina, azul de anilina con abrillantador fluorescente o acetocarmín combinado con azul de anilina acidificado (cualquiera de los colorantes se puede usar para teñir la muestra)

Procedimiento

  • Usando pinzas, separe suavemente los pistilos de las otras partes de la flor.
  • Colocar los pistilos en el fijador por aproximadamente 36 horas (solución de granjero, alcohol etílico o formalina-ácido acético-alcohol)
  • Transferir la muestra a etanol al 70 por ciento
  • Transfiera la muestra a destilar durante unos 10 minutos y colóquela en la solución suavizante (8 M NaOH o 10 M NaOH) durante unas 10 horas.
  • Retirar la muestra de la solución suavizante y lavar con agua destilada (retirar también el ovario al lavar)
  • Teñir la muestra utilizando uno de los colorantes mencionados anteriormente,
  • Decolorar con azul de anilina al 0,1% en fosfato potásico durante unas 2 horas en cuarto oscuro y montar con una gota de lejía
  • Coloque el cubreobjetos en el portaobjetos y observe la muestra bajo el microscopio.

Observación

Cuando se observan bajo un microscopio, los tubos se verán como tubos frágiles (como pajitas flexibles).


Para microscopía electrónica, la acetólisis es uno de los métodos más utilizados para preparar polen. Sin embargo, se demostró que causaba distorsiones, lo que influyó en el desarrollo de un método nuevo y mejor. Uno de los mejores y más nuevos métodos implica el uso de Aerosol-OT y acetato de amilo.

* la acetólisis implica el uso de ácido acético con el fin de descomponer los compuestos (compuestos orgánicos)

Requisitos

Procedimiento

  • Retire con cuidado las anteras de la flor y sumérjalas en una solución de aerosol-OT al 3% para suavizarlas.
  • Retire con cuidado el polen de las anteras y colóquelas en un tubo de centrífuga de 15 ml.
  • Guarde la muestra de polen en la solución Aerosol-OT durante aproximadamente 5 días para su rehidratación.
  • Usando la pipeta, vacíe la solución Aerosol-OT del tubo y agregue agua durante aproximadamente 10 minutos.
  • Después de 10 minutos, drene el agua y agregue la mezcla de acetona / agua (1: 1) durante aproximadamente una hora
  • Centrifugar ligeramente el tubo para concentrar los granos de polen
  • Coloque el tubo en un baño ultrasónico durante un minuto para sonicar los granos.
  • Drene la solución de mezcla y reemplácela con una mezcla fresca y déjela reposar durante aproximadamente 1 hora (esto limpia cualquier exceso de material de la superficie de los granos de polen)
  • Sustituir la mezcla de acetona/agua por agua destilada y dejar reposar durante 10 minutos
  • Retire el agua destilada y agregue etanol al 50 por ciento y deje reposar durante una hora.
  • Reemplace el 50 por ciento de etanol con 70 por ciento de etanol durante una hora
  • Durante períodos de una hora, reemplace el 70 por ciento de etanol con 90 por ciento de etanol y 100 por ciento de etanol (repita el 100 por ciento de etanol dos veces) para la deshidratación (para la segunda ronda con 100 por ciento de etanol, deje reposar durante aproximadamente 4 horas)
  • Drene el etanol y agregue acetato de amilo durante aproximadamente una hora (esto se hace para prepararse para el punto crítico de secado)
  • Retire los granos de polen del tubo y transfiéralos a una cápsula BEEM modificada.
  • Cubra los extremos del cilindro y empuje el cilindro dentro de la tapa.
  • Retire con cuidado el acetato de amilo para atrapar el polen.
  • Usando una pipeta, transfiera los granos de polen a la canasta
  • Colocar las cestas en el secador de punto crítico
  • Retire la cubierta superior y gire el cilindro abierto para que los frijoles encajen en los pernos.
  • Para hacer flotar los granos en la superficie del espárrago, puede golpear suavemente la canasta
  • Antes de ver los granos se deben sombrear con oro

Observación

Cuando se observan bajo el SEM, los granos pueden verse claramente como estructuras hinchadas o desinfladas (de diferentes formas) con superficies ásperas o hendiduras según el tipo de polen observado.

Vistos bajo un microscopio (microscopios compuestos o microscopios electrónicos), los granos pueden tener diferentes tipos de ornamentación, estando la ornamentación distribuida irregularmente sobre la superficie de los granos.

Por ejemplo, mientras que algunos de estos adornos pueden ser visibles sobre toda la superficie del grano, otros pueden estar presentes solo en los extremos de los polos del grano oa través de determinadas secciones de la superficie del grano.

Puedes ver más experimentos a continuación:

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